Cytotoxicity and in vitro activity of chard (Beta vulgaris L. var Cicla) extracts on porcine pancreatic islets / Citotoxicidad y actividad in vitro de extractos de acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) en islotes pacreáticos porcinosa / Citotocidae e atividade in vitro de extratos de acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) em ilhotas pancreáticas porcinas

Background: reports from traditional medicine suggest that chard (Beta vulgaris L. var Cicla) can have remarkable effects in diabetes therapy. Objective: to evaluate the cytotoxic activity of chard extracts in cell lines and determine the viability of cultured porcine pancreatic islets added with or without chard extracts. Methods: cytotoxic activity of chard extracts was assessed in non-tumor and tumor cell lines using the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] technique, and the ability of extracts to maintain porcine pancreatic islets viability and regeneration in vitro was tested. Results: the 50% cytotoxic concentration (CC50) of extracts for non-tumor cell lines was above 1,000 μg/mL, while it was 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL and 380 μg/mL, for hexane, ethyl acetate, ethanol and water extracts in the tumor cell line, respectively. The CC50 ratio between cell lines indicates that ethanol extract is 7.5 times more toxic to tumor than non-tumor cell lines. There was an increase in viability of porcine pancreatic islets cultured with aqueous, ethyl acetate, and ethanol extracts compared with standard media (CMRL1066) and Cyclosporine A (CsA) control groups. Furthermore, a greater than one regeneration index of islets cultured with ethanol extract at 1,000 μg/mL and 500 μg/mL concentrations during 15 days was observed, which remained constant and was significantly higher than CsA group. Conclusions: these results suggest that chard metabolites should be researched to develop antitumor therapies and human pancreatic islets recovery in diabetes treatment.

Antecedentes: reportes de medicina tradicional sugieren que la planta acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) es importante en el tratamiento de enfermedades como la diabetes. Objetivo: evaluar la citotoxicidad de concentraciones de extractos de acelga en líneas celulares y determinar la viabilidad de islotes pancreáticos porcinos cultivados con y sin extracto de acelga. Método: se evaluó la actividad citotóxica en líneas celulares tumorales y no tumorales, con la técnica del MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]. Específicamente se hicieron ensayos para comprobar si los extractos de acelga tienen la capacidad de mantener la viabilidad de islotes pancreáticos porcinos aislados e influir en su regeneración in vitro. Resultados: la concentración citotóxica al 50% (CC50) de los extractos en líneas no tumorales fue mayor de 1.000 μg/mL, mientras que para los extractos en hexano, acetato de etilo, etanol y agua fue de 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL y 380 μg/mL, respectivamente, en líneas tumorales. La proporción CC50 encontrada indica que el extracto en etanol es 7,5 veces más tóxico para las líneas celulares tumorales que para las no tumorales. Igualmente encontramos un aumento en la viabilidad de los islotes pancreáticos porcinos cultivados con extracto acuoso, de acetato en etilo y etanol en comparación con el medio de cultivo estándar (CMRL1066) y un control inhibidor que contenía medio con Ciclosporina A (CsA). Además, se encontró que el índice de regeneración era mayor de uno en los islotes cultivados con el extracto en etanol a concentraciones de 1.000 μg/mL y 500 μg/mL durante 15 días, que se mantuvo constante y fue significativamente mayor en comparación con el grupo de CsA. Conclusión: estos resultados sugieren que los metabolitos de la acelga podrían ser utilizados en la investigación de nuevos fármacos para el desarrollo de terapias antitumorales y recuperación de islotes pancreáticos en el tratamiento de la diabetes.

Antecedentes: relatos encontrados em medicina sugerem que a planta acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) tem un papel importante no tratamento das doenças como a diabetes. Objetivo: avaliar a citotoxicidade de concentrações de extratos em linhagens celulares e determinar a viabilidade de ilhotas pancreáticas de porcos cultivadas com e sem extrato de acelga. Métodos: neste trabalho foi avaliada a atividade citotóxica dos extratos da acelga em linhagens celulares tumorais e não tumorais, usando a técnica do MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide]; além disso, foram feitos ensaios para verificar a capacidade que têm os extratos para manter a viabilidade das ilhotas pancreáticas isoladas de porcos e a influência em sua regeneração in vitro. Resultados: a concentração citotóxica ao 50% (CC50) dos extratos em linhagens não tumorais está acima de 1000 μg/mL, enquanto para os extratos de hexano, acetato de etilo, etanol y água é de 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL y 380 μg/mL, respectivamente, em linhagens tumorais. A proporção CC50 entre a célula indica que o extrato de etanol é 7,5 vezes mais tóxico para as linhas celulares tumorais que para as linhas não tumorais. Houve um aumento na viabilidade dos isolados pancreáticos de porcos cultivados com extrato aquoso, de acetato de etilo y etanol, em comparação com o meio de cultura padrão (CMRL 1066) e um controle inibitório contendo meio com Ciclosporina A (CsA). Encontrou-se também uma taxa de regeneração maior do que um em ilhotas cultivadas com concentrações de 1000 μg/mL e 500 μg/mL durante 15 días, que se manteve constante e foi significativamente mais elevada em comparação com a CsA. Conclusões: estes resultados sugerem que os metabolitos da acelga poderiam ser usados para a pesquisa de novas drogas para o desenvolvimento de terapias antitumorais e recuperação de ilhotas pancreáticas para o tratamento da diabetes.

Ribonucleases in HIV type 1 inhibition: effect of recombinant RNases on infection of primary T cells and immune activation-induced RNase gene and protein expression.

Ribonucleases (RNases) have therapeutic potential against cancer and viral diseases and have been reported to inhibit replication of the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) in chronically infected cell lines. The ribonuclease eosinophil-derived neurotoxin (EDN) is responsible for the anti-HIV-1 activity of a soluble factor produced in response to human alloantigens (ASF). Four recombinant RNases (EDN; a four amino acid extension of the N-terminus EDN, -4EDN; RNase A; and angiogenin) were tested for inhibition of HIV-1 replication in PHA blasts. All RNases showed anti-HIV-1 activity, irrespective of whether the RNases were added before, during, or 2 h after infection. Polyclonal antibodies against the four RNases blocked the antiviral activity. ASF inhibited HIV-1 replication in vitro if added up to 4 h after infection. We demonstrated that allostimulation induced EDN, RNase A, and angiogenin mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), although only EDN protein was detected. We identified monocytes and dendritic cells, but not macrophages or T cells, as EDN-producing cells. These findings raise the possibilities that multiple naturally occurring RNases may contribute to protection against HIV-1 infection and could be considered for utilization in HIV-1 therapy.

Ribonuclease is partly responsible for the HIV-1 inhibitory effect activated by HLA alloantigen recognition.

OBJECTIVE: This study was performed to determine whether ribonucleases (RNases) contribute to the soluble HIV-1 inhibitory activity that results from the recognition of HLA alloantigens. DESIGN AND METHODS: Supernatants from mixed lymphocyte reactions of peripheral blood mononuclear cells from healthy HLA-discordant individuals exhibited HIV-1 inhibitory activity (alloantigen-stimulated factors; ASF). These supernatants were tested for their sensitivity to heating (90 degrees C for 3 min), and for the presence of three RNases belonging to the RNase A superfamily: eosinophil-derived neurotoxin (EDN); RNase A; and angiogenin. Polyclonal antibodies specific for these RNases were used for Western blot analysis of the ASF, as well as for blocking the HIV-1 inhibitory activity of ASF. In addition, an RNase inhibitor (RI) was used to determine whether the anti-viral activity of ASF was due to RNase activity. RESULTS: HIV-1 inhibitory activity of ASF was: (i). resistant to heat treatment; (ii). blocked by 58% with an antibody specific for EDN, but not with antibodies against RNase A or angiogenin; and (iii) blocked by 65-100% with an RI. Moreover, Western blot analysis with an anti-EDN antibody detected EDN in the ASF. CONCLUSION: These findings indicate that the majority of the soluble HIV-1 inhibitory activity contained in the supernatants of mixed lymphocyte reactions is due to EDN or a closely related RNase.

Inmunologia del virus de la inmunodeficiencia humana / Immunology of the human immunodeficiency virus

Propósito: realizar una revisión de la literatura sobre las características de los mecanismos de respuesta inmune que se activan en cada una de las etapas de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), los tipos de respuesta observada entre diferentes subgrupos de individuos infectados y los factores genéticos, ambientales y virológicos que influyen o determinan la velocidad de progresión de la infección. Fuentes de los datos: se hizo una búsqueda sistemática de artículos originales en las bases de datos de PubMed y Medline publicados desde 1988 hasta abril de 2002, se revisaron los artículos identificados y las revisiones publicadas por expertos. Selección de los estudios: se encontraron 329 artículos. Se seleccionaron estudios clínicos y experimentales controlados o con grupos comparativos prospectivos y retrospectivos con datos suficientes sobre marcadores inmunológicos, virológicos y genéticos relacionados con la historia natural de la infección del VIH y la progresión de la enfermedad que permitieran calcular la razón de disparidad, Extracción de los datos: los artículos se clasificaron y analizaron de acuerdo a si se referían a marcadores inmunológicos, virológicos, genéticos de infección por VIH-1 y/o progresión a síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y si eran artículos originales o revisiones. En el caso de marcadores inmunológicos se clasificaron de acuerdo a si estudiaban la inmunidad humoral o celular. Resultados y síntesis de los datos: el sistema inmune es incapaz de asumir el control de la infección por el VIH-1 porque las células CD4+ son blanco del virus, se infectan en forma productiva y mueren rápidamente por diferentes mecanismos. Los linfocitos T CD8+ o células citotóxicas son importantes en la respuesta inmune anti-VIH-1, con una gran correlación entre una respuesta vigorosa y el control inicial de la replicación del VIH-1 durante la infección primaria...

Frecuencia de mutaciones en el correceptor CCR5 del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en diferentes grupos en Medellín, Colombia / Mutation frequency in CCR5 HIV virus Co-receptor, in different groups in Medellín

Introducción: la exposición repetida al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) no siempre llevan la infección, multiples factores de resistencia han sido propuestos, pero sólo una mutación, la delección de 32 pares de base (delta 32)en el gen que codifica por la molécula CCR5, confiere un alto grado de protección; esta molécula es el principal correceptor del virus: Objetivos: determinar la frecuencia de delta 32 en Medellín, Colombia y buscar otros polimorfismos en el gen ccr5 en individuos expuestos al VIH y seronegativos (ESNs). Materiales y métodos: la mutación delta 32 se determinó por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en 218 individuos: 29 seropositivos (SP), 39 ESN y 150 individuos de la población general (PG). Por medio de la técnica de polimorfismos conformacionales de cadena simple (SSCP) se buscaron otras mutaciones en el gen ccr5 en la población de ESNs. Resultados: la frecuencia del alelo delta 32 fué de 3.8 por ciento para ESN, 2.7 por ciento para PG y 1.7 por ciento para SP. Entre los ESNs se encontró el único genotipo homocigótico mutado (ccr5/ delta 32/delta 32), se encontro en el 5.3 por ciento de la PG y en 2.6 por ciento de SP y de ESNs. Las diferencias en las frecuencias alélicas y genotipicas entre los grupos no fueron estadísticamente significativas. La comparación entre las frecuencias genotípicas esperadas y observadas mostró que estas frecuencias eran significativamente diferentes en el grupo de ESNs. Lo que sugirió en forma indirecta, un efecto protector del geneotipo gemocigótico mutado en delta 32/delta 32. No se encontró ninguna otra mutación en el gen ccr5. Conclusión: la baja frecuencia del genotipo homocigótico mutado delta 32/delta 32y la ausencia de otras mutaciones en ccr5 en los ESNs sugierén la presencia de otros mecanismos de resitencia a la infección por VIH en nuestra población

Infección viral del tracto respiratorio inferior

Las infecciones respiratorias agudas son una de las principales causas de morbilidad y mortalidad entre los niños. Con el desarrollo de tecnologías de diagnóstico rápido para la detección de antígenos virales es posible reconocer el agente viral de la infección respiratoria en horas. El diagnóstico etiológico de infección respiratoria viral es no sólo cada vez más importante para la selección apropiada de los pacientes que deben recibir tratamiento antiviral o con antibióticos, sino también para el control de la diseminación de las infecciones respiratorias virales en salas pediátricas. En la Clínica Amparo Infantil Santa Ana de Medellín ocurrió un brote de infección respiratoria aguda del tracto respiratorio inferior en el último trimestre de 1994 producida por virus. Los virus detectados fueron virus respiratorio sincitial 41.8 por ciento, adenovirus 33,3 por ciento, parainfluenza tipo 1, en el 8.3 por ciento e infección mixta en el 16.7 por ciento. Se describe el método diagnóstico utilizado en la detección de los antígenos virales y las características de este brote.